＜第１８回　遺伝子技術講習会＞

主催：遺伝子実験施設

『リアルタイム定量ＰＣＲの原理と応用』


機　器；ABI PRISM 7700（アプライド・バイオシステムズ）
日　時；平成１２年　９月　６日（水）
　　　　　１０：００〜１５：００
場　所；遺伝子実験施設・６階・講義室（６０２）
講　師；勝本　博　氏
　　　　アプライド・バイオシステムズ
　　　　フィールドアプリケーション
内　容；
１０：００〜１０：３０　基本原理説明
１０：３０〜１２：００　リアルタイム定量のセットアップ＆解析
　　　ーーー昼休みーーー
１３：００〜１４：００　対立遺伝子識別のセットアップ＆解析
１４：００〜１５：００　プライマー設計ソフト（Primer Express）
　　　　　　　　　　　　の取り扱い説明、その他質疑応答
　技術講習会終了後、希望者のみ、５階・機器分析室（５０２）へ 移動して、７７００の使用方法を、機械の前で補足説明します。
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　遺伝子実験施設・５階・機器分析室（５０２）に設置している 「ABIPRISM 7700」は、出発物質の定量を可能にしたリアルタ イムＰＣＲ産物分析装置です。
　ＰＣＲ産物を検出する手段として一般的に行われている方法は、 アガロースゲルやアクリルアミドゲルを用いて電気泳動を行い、 エチジウムブロマイド（ＥｔＢｒ）などで染色し、ポラロイドカ メラで写真撮影を行うという方法です。この方法は、ＰＣＲ産物 の大きさを調べるという定性的な実験として大変重要なのですが、 定量的なデータを得ることは出来ません。また、ＰＣＲ反応中に ラジオアイソトープや蛍光色素を取り込ませることにより、得ら れた PCR 産物を直接定量する方法もありますが、このようなエン ドポイント解析では、 ＰＣＲ産物の量は定量出来ますがスタート 時のサンプルの量を正確に決定することは不可能です。
　ABI PRISM 7700 は、このようなＰＣＲ法の欠点を補うために、 リアルタイム解析という全く新しいシステムを導入しています。 この方法は、ＰＣＲの各サイクル毎に産生される活性化蛍光色素 の量をリアルタイムで検出することにより、10の5乗以上のダイナ ミックレンジで出発物質の定量を可能にしました。
　今回は、７７００のコントロール及び解析に使用しているパソコン を講義室に移設し、プロジェクターを用いて、パソコン画面をスク リーンに映しながら解説します。
　技術講習会終了後（１５：００以降）、実際に機械を使用する予 定のある希望者を対象に、５０２号室へ移動して、機械の前で補足 説明を行います。

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熊本大学・遺伝子実験施設,　E-mail:WWW@gtc.gtca.kumamoto-u.ac.jp