研究発表を行った学会；第52回日本ウイルス学会学術集会・総会
２００４年１１月２１日〜１１月２３日（横浜）
タイトル；HTLV-I感染性分子クローンにおけるTax 遺伝子のスプライシング
発表者；大杉　剛生　氏
　　　（熊本大学　生命資源研究・支援センター　病態遺伝分野）
Abstract；
　我々が作製したHTLV-I（ヒトT細胞白血病ウイルス）感染性分子クローン中に、ウイルス発現の低いクローンが観察され、このクローンではウイルス発現に重要な役割を果たすTaxの発現がほとんどみられない。Taxタンパクをコードするtax遺伝子は、2回のスプライシングによりenv遺伝子発現に用いられる開始コドンAUG（exon2）とpX領域(exon3)が融合、発現する。もしこのスプライシングに異常があればtax遺伝子低発現の原因となる。この感染性分子クローンのウイルス低発現の原因として、tax遺伝子スプライシングの異常が関与しているか検討した。exon2と3のスプライシング領域をはさむPCRによって野生型クローンは195bpの1本のバンドを示したが、低発現クローンおよびそのクローンより作製したウイルス粒子では2本のバンドが得られ、270bpのバンドの方がおおよそ5倍発現が高かった。195bpと270bpの塩基配列を比較したところ、270bpの産物はexon2と3のイントロン 3'側のAG直前のATC配列がACCと7298番のTがCに変異しており、通常のGT-AG則で使われるAGの75bp前のAGが使用されていた。この1塩基変異がスプライシング異常を引き起こすか、低発現クローンの7298番のCのみTに置換したクローンで検討したところ、正常のスプライシングが行われ、ウイルス発現も回復した。スプライシング異常によって産生されると予想される75bp長いtax遺伝子を発現するプラスミドを構築し、野生型クローンとco-transfectionするとウイルス発現は抑制され、さらにHTLV-I感染細胞株にtransfectionするとウイルス発現を抑制した。以上の成績から、GT-AG則のAGの2塩基上流の7298番のTがCに変異することにより、スプライシングに異常が生じ、N末端に25aa付加したTaxが発現、これがウイルス低発現の原因であると考えられた。現在、このスプライシング異常のHTLV-I感染症での意義、抗ウイルス活性について検討中である。